产品简介

衍生化技术的主要目的是提升目标物质的可检测性，增强检测器对目标物质的响应能力。在弱碱性溶液中，OPA和3-MPA能够与氨基酸中的羰基及氨基反应，生成衍生物，并在紫外光激发下，发射出波长更长的荧光。衍生物的荧光强度与其浓度呈正比关系，从而可以计算出样品中氨基酸的含量。这种方法具有快速、准确、高灵敏度和广泛适用性等显著优点。

商品信息

货号: SDK1010
名称: 氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
规格: 25T/50T
储存条件: 2-8℃

注：获取更多信息，请联系网站负责人。

实验步骤

1. 流动相A的配制: 取适量超纯水分别溶解流动相A1、A2和A3，溶解后将其转移至1L容量瓶，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，确保试剂充分溶解，最后用超纯水定容至1L，混匀后经过022μm有机相膜待用。

2. 流动相B的配制: 取适量超纯水溶解流动相B，转移至1L容量瓶，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈，最后用超纯水定容至1L，混匀后经过022μm有机相膜待用。

3. 将配制好的流动相A、B进行超声波处理30分钟，以去除溶剂中的气体，避免阻塞色谱柱，以确保实验结果的准确性。

4. 标准溶液的配制（标准品需用户自备）: 取一定量氨基酸标准品，用0.1M HCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，通过022μm水相膜过滤。

5. 衍生试剂的配制: 取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、4.5mL试剂三和50μL试剂四，避免光线，混匀后备用。该配制可得到约5mL的衍生化试剂，可进行25次手动衍生，具体量可根据需要进行相应调整。

6. 打开电脑及液相色谱仪各模块开关（使用FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%），打开软件，设置柱温为35℃，流速1mL/min，激发波长（λex）为340nm，发射波长（λem）为450nm，洗脱程序如表所示，运行60分钟后保存方法组。

7. 进样前需用初始流动相平衡色谱柱，采用流动相A与流动相B的比例为90:10，平衡30分钟或更久，待基线稳定后开始进样。

8. 自动衍生（进样程序设定）: 吸取1μL氨基酸标准溶液，加入2μL经过022μm有机相膜的衍生试剂、2μL经过022μm水相膜的试剂三，空气中混合5次，等待1分钟后进样。

9. 若色谱仪不具备自动衍生功能，可以手动操作：吸取100μL氨基酸标准溶液，加入200μL衍生试剂和200μL试剂三，涡旋混合5次，每次30秒，静置1分钟后通过022μm有机相膜上样。

10. 实验需要同时做空白对照：即用等量的0.1M HCl重复上述步骤，以排除干扰。

检测结果示例

相关产品

尊龙凯时色谱分析检测技术服务。