随着分子检测技术的不断进步,甲基化qPCR和甲基化NGS检测已逐渐成为广泛应用的检测手段。这两种技术的关键步骤是甲基化转化,方法学上可以分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化。近年来,基于DNA甲基化位点的检测试剂盒不断获得批准并进入市场。大多数获得NMPA批准的甲基化检测试剂盒采用荧光PCR法,主要因为其操作简便、无需后续电泳,并且具备高灵敏度、强特异性和良好重复性等优点。这些检测试剂盒大都采用亚硫酸氢盐转化法,该方法已成为DNA甲基化检测的“金标准”。
然而,传统的亚硫酸氢盐转化存在诸多局限性,例如转化时间过长、DNA损伤严重、5mC水平可能被高估以及C-U转化不彻底等问题。2024年1月2日,芝加哥大学何川教授团队在《Nature Biotechnology》上在线发表了一项题为《Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5-methylcytosine in DNA and RNA》的研究,提出并开发了一种新型测序方法,简称为UBS-seq,用于快速、准确检测DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修饰。这项技术比现有的转化反应加速了20-30倍,显著降低了DNA损伤和由于C-U转换不完全带来的背景干扰。
基于此技术,翌圣生物推出了Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit(柱式:强烈推荐)和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit(磁珠法:强烈推荐)。这两个产品在98°C下仅需5分钟即可完成超过99.5%的胞嘧啶转化,并显著降低了DNA损伤,从而更好地保证了DNA片段的完整性。整套BS转化流程大约在35分钟内即可完成,转化后的产物适合用于PCR扩增和DNA测序等下游应用。
产品亮点方面,Hieff®的技术在不同量的293gDNA条件下显示出优异的转化率,尤其在与其他品牌(竞品)进行对比时,其转换率稳定在99.5%以上。此外,该产品对cfDNA和FFPE DNA样本的兼容性也非常高,保证了在多种样本条件下的有效使用。同时,经过定量分析,Hieff®产品的样本回收率稳定在60%以上,在样本量大于200ng的情况下,回收率甚至可以超过70%。
最后,该产品还特别适用于单细胞甲基化建库的研究。在微流控的自动化单细胞DNA甲基化平台上进行的实验显示,单细胞DNA的转化率接近99%。这使得Hieff® Superfast DNAMethylation Bisulfite Kit和Hieff® Mag Superfast DNAMethylation Bisulfite Kit成为生命科学研究者的理想选择。
总之,借助尊龙凯时推出的创新性甲基化转化试剂盒,科研人员可以在更短的时间内进行更高效的DNA甲基化检测,助力生物医学领域的进一步发展。